家蚕半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(bcpi)的克隆与表达分析

• 作者: 侯勇 周霞 夏庆友 李建伟 杨欢 田莎 郭超 龚竞
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 家蚕 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 蜕皮激素 变态发育
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1915-1924
• 分类号: S881.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.12.014

摘要

家蚕(Bombyx mori)体内存在一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Bombyx cysteine proteinase inhibitor,BCPI),其可抑制半胱氨酸蛋白酶的活性,并且在RaslCA家蚕的丝腺组织中高量表达.为了进一步阐明BCPI在家蚕体内的生物学功能,本研究利用分子生物学的手段对bcpi基因进行了研究,对其在不同组织和时期的表达特征和响应蜕皮激素的情况进行了分析.结果表明,bcpi基因CDS全长315个碱基,编码105个氨基酸,N端具有19个氨基酸的信号肽结构域.反转录PCR (reverse transcription PCR,RT-PCR)和实时荧光定量PCR (quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)的结果显示,bcpi基因主要在血细胞中表达,在头部、体壁等组织中也有微量表达.从发育时期上来看,该基因在上蔟期和羽化变态期存在上调表达.Western blot检测结果表明,BCPI蛋白主要存在于血淋巴中,并且在上蔟期和蛹后期血淋巴中的含量明显升高.当用蜕皮激素处理家蚕时,bcpi基因发生明显上调表达,但是双荧光素酶报告系统的结果显示,在细胞水平bcpi上游1 500 bp启动子的活性受到蜕皮激素的抑制,推测其在体内有更复杂的调控机制.以上结果为深入研究BCPI的功能提供了更多的参考信息.