15重快速STR复合扩增体系的构建

• 作者: 刘耀 刘鹏 叶健 孙敬 张译文 欧元 王雪倩 赵雯雯 韩俊萍
• 来源期刊: 法医学杂志
• 学科: 政治法律
• 关键词: 法医遗传学 短串联重复序列 聚合酶链反应 体系建立
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与应用
• 页码范围: 49-53
• 页数: 5页
• 分类号: DF795.2
• 字数: 4659字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5619.2016.01.011

摘要

目的 建立一套15重快速STR复合扩增体系. 方法 选择14个常染色体基因座以及1个性别基因座,采用FastStart Taq DNA聚合酶系统,以DNA标准品9947A为模板,通过筛选扩增条件、选择热启动酶用量、调整引物平衡、优化快速扩增程序、筛选反应缓冲液、选择反应体系以及筛选添加剂等一系列复合扩增实验,比较各条件下等位基因丢失和非特异性扩增情况. 结果 在以1 ng DNA为模板、0.4 μL聚合酶及10×FastStart高保真反应缓冲液构成10 μL快速体系的条件下,32 min即可获得标准DNA全部15个STR基因座的完整分型,无等位基因丢失和非特异性扩增现象,等位基因均衡性良好.同时,5％甘油、0.01％明胶、0.05％明胶和5 mmol/L硫酸铵可作为PCR扩增过程中拟加入的反应添加剂. 结论 本研究建立的15重快速STR复合扩增体系可以明显缩短反应时间,提高样品检测效率.