雌激素受体β基因沉默对人成骨细胞转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2表达的影响

• 作者: 刘少华 刘金洋 唐明星 张宏其 王昱翔 邓盎 郭超峰 高琪乐
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 骨细胞 雌激素受体β 人成骨细胞 RNA干扰 转化生长因子β1 骨形态发生蛋白2 基因沉默 骨代谢 雌激素 反转录病毒 细胞模型 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2016,（29）
• 所属期刊栏目: 研究与报告 -- 骨组织构建
• 页码范围: 4261-4268
• 页数: 8页
• 分类号: R318
• 字数: 6839字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.29.001

摘要

背景：雌激素受体β基因参与骨代谢的研究较少，其对骨代谢的具体调节机制仍不清楚。目的：分析雌激素受体β基因沉默对人成骨细胞转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2表达的影响。方法：实验分3组：空白对照组(即hFOB 1.19，未感染任何反转录病毒)、阴性对照组(即含无效干扰片断雌激素受体β-shRNA-nc)、最佳RNAi组(即ERβ-shRNA-3)。将前期最佳RNAi组的雌激素受体β-shRNA反转录病毒载体感染人成骨细胞，通过抗性筛选并扩大培养，利用MTT法检测雌激素受体β稳定抑制后对细胞增殖的影响；随后在雌激素干预下，通过Western blot技术检测雌激素受体β蛋白表达的稳定抑制效率，并使用半定量RT-PCR和Western blot技术检测雌激素受体β稳定抑制后对转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2表达的影响。结果与结论：①成功筛选出稳定感染ERβ-shRNA-3反转录病毒载体的人成骨细胞，MTT法检测显示雌激素受体β稳定抑制后对细胞的增殖没有明显影响(P>0.05)；②在雌激素干预下，雌激素受体β蛋白的抑制率为(93.11±0.57)%(P<0.05)，且雌激素受体β稳定抑制后对转化生长因子β1 mRNA和蛋白的上调率分别为(26.65±3.81)%和(23.79±3.76)%，骨形态发生蛋白2 mRNA和蛋白的上调率分别为(16.62±1.71)%和(18.08±3.20)%(均P<0.05)；③结果提示雌激素受体β可能通过调控转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2的表达在骨代谢中发挥作用。