shAkt2慢病毒表达载体的构建及其对H292细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 刘丹 李为民 蒋莉 陈渤江
• 来源期刊: 西部医学
• 学科: 医学
• 关键词: 非小细胞肺癌 Akt2慢病毒载体 细胞增殖 凋亡
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 22-27
• 页数: 6页
• 分类号: R373
• 字数: 4073字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3511.2016.01.006

摘要

目的 构建shAk2基因慢病毒表达载体,获得稳定干扰Akt2基因的细胞克隆,建立靶向沉默Akt2的非小细胞肺癌稳定细胞株,并探讨Akt2基因在非小细胞肺癌中的作用.方法 根据shRNA干扰序列设计原则,设计并合成针对Akt2靶基因的双链寡核苷酸序列,经退火、酶切、连接反应,将干扰序列插入pLKD.CMV.GFP.U6质粒,经感受态细胞转化、阳性克隆测序鉴定所插入的片段,抽提重组质粒及辅助包装元件载体质粒p-Helper1.0和p-Helper2.0,通过阳离子脂质体lipofectemin2000介导细胞转染及慢病毒包装,收集浓缩病毒进行滴度测定,感染至人肺腺癌细胞H292,通过无菌流式细胞分选GFP强阳性细胞,应用Western-blot验证干扰效果.CCK-8比色法检测细胞增殖,Annexin V.FITC/PI双染法检测细胞凋亡.结果 与正常对照组比较,shAkt2组细胞中Akt2蛋白水平减少90.89％,提示靶向抑制Akt2的慢病毒shRNA表达载体构建成功,并获得稳定抑制Akt2基因表达的细胞克隆.CCK-8法检测细胞增殖能力,shAkt2组细胞在48h,72h,96h及120h的吸光度值明显减低(P＜0.05),干扰Akt2基因表达后显著抑制细胞增殖速率.采用Annexin-V/7-AAD流式细胞分析法检测各组中凋亡细胞的比例,shAkt2组凋亡率显著高于NC及NSCLC组(P＜0.05).结论靶向干扰Akt2基因表达可抑制肺腺癌细胞株H292细胞的增殖能力,促进其凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李为民	四川大学华西医院呼吸科	186	1195	17.0	27.0
2	刘丹	四川大学华西医院呼吸科	116	499	13.0	17.0
3	陈渤江	四川大学华西医院呼吸科	3	20	3.0	3.0