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shAkt2慢病毒表达载体的构建及其对H292细胞增殖和凋亡的影响
shAkt2慢病毒表达载体的构建及其对H292细胞增殖和凋亡的影响
作者:
刘丹
李为民
蒋莉
陈渤江
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
非小细胞肺癌
Akt2慢病毒载体
细胞增殖
凋亡
摘要:
目的 构建shAk2基因慢病毒表达载体,获得稳定干扰Akt2基因的细胞克隆,建立靶向沉默Akt2的非小细胞肺癌稳定细胞株,并探讨Akt2基因在非小细胞肺癌中的作用.方法 根据shRNA干扰序列设计原则,设计并合成针对Akt2靶基因的双链寡核苷酸序列,经退火、酶切、连接反应,将干扰序列插入pLKD.CMV.GFP.U6质粒,经感受态细胞转化、阳性克隆测序鉴定所插入的片段,抽提重组质粒及辅助包装元件载体质粒p-Helper1.0和p-Helper2.0,通过阳离子脂质体lipofectemin2000介导细胞转染及慢病毒包装,收集浓缩病毒进行滴度测定,感染至人肺腺癌细胞H292,通过无菌流式细胞分选GFP强阳性细胞,应用Western-blot验证干扰效果.CCK-8比色法检测细胞增殖,Annexin V.FITC/PI双染法检测细胞凋亡.结果 与正常对照组比较,shAkt2组细胞中Akt2蛋白水平减少90.89%,提示靶向抑制Akt2的慢病毒shRNA表达载体构建成功,并获得稳定抑制Akt2基因表达的细胞克隆.CCK-8法检测细胞增殖能力,shAkt2组细胞在48h,72h,96h及120h的吸光度值明显减低(P<0.05),干扰Akt2基因表达后显著抑制细胞增殖速率.采用Annexin-V/7-AAD流式细胞分析法检测各组中凋亡细胞的比例,shAkt2组凋亡率显著高于NC及NSCLC组(P<0.05).结论靶向干扰Akt2基因表达可抑制肺腺癌细胞株H292细胞的增殖能力,促进其凋亡.
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文献信息
篇名
shAkt2慢病毒表达载体的构建及其对H292细胞增殖和凋亡的影响
来源期刊
西部医学
学科
医学
关键词
非小细胞肺癌
Akt2慢病毒载体
细胞增殖
凋亡
年,卷(期)
2016,(1)
所属期刊栏目
基础医学研究
研究方向
页码范围
22-27
页数
6页
分类号
R373
字数
4073字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1672-3511.2016.01.006
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
李为民
四川大学华西医院呼吸科
186
1195
17.0
27.0
2
刘丹
四川大学华西医院呼吸科
116
499
13.0
17.0
3
陈渤江
四川大学华西医院呼吸科
3
20
3.0
3.0
传播情况
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引证文献(2)
二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
非小细胞肺癌
Akt2慢病毒载体
细胞增殖
凋亡
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
西部医学
主办单位:
四川
出版周期:
月刊
ISSN:
1672-3511
CN:
51-1654/R
开本:
大16开
出版地:
成都市武候区浆洗街8号国嘉南苑10F-6号
邮发代号:
62-243
创刊时间:
2003
语种:
chi
出版文献量(篇)
11853
总下载数(次)
7
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:
the National Natural Science Foundation of China
官方网址:
http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:
青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:
数理科学
期刊文献
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