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摘要:
目的 构建shAk2基因慢病毒表达载体,获得稳定干扰Akt2基因的细胞克隆,建立靶向沉默Akt2的非小细胞肺癌稳定细胞株,并探讨Akt2基因在非小细胞肺癌中的作用.方法 根据shRNA干扰序列设计原则,设计并合成针对Akt2靶基因的双链寡核苷酸序列,经退火、酶切、连接反应,将干扰序列插入pLKD.CMV.GFP.U6质粒,经感受态细胞转化、阳性克隆测序鉴定所插入的片段,抽提重组质粒及辅助包装元件载体质粒p-Helper1.0和p-Helper2.0,通过阳离子脂质体lipofectemin2000介导细胞转染及慢病毒包装,收集浓缩病毒进行滴度测定,感染至人肺腺癌细胞H292,通过无菌流式细胞分选GFP强阳性细胞,应用Western-blot验证干扰效果.CCK-8比色法检测细胞增殖,Annexin V.FITC/PI双染法检测细胞凋亡.结果 与正常对照组比较,shAkt2组细胞中Akt2蛋白水平减少90.89%,提示靶向抑制Akt2的慢病毒shRNA表达载体构建成功,并获得稳定抑制Akt2基因表达的细胞克隆.CCK-8法检测细胞增殖能力,shAkt2组细胞在48h,72h,96h及120h的吸光度值明显减低(P<0.05),干扰Akt2基因表达后显著抑制细胞增殖速率.采用Annexin-V/7-AAD流式细胞分析法检测各组中凋亡细胞的比例,shAkt2组凋亡率显著高于NC及NSCLC组(P<0.05).结论靶向干扰Akt2基因表达可抑制肺腺癌细胞株H292细胞的增殖能力,促进其凋亡.
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内容分析
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文献信息
篇名 shAkt2慢病毒表达载体的构建及其对H292细胞增殖和凋亡的影响
来源期刊 西部医学 学科 医学
关键词 非小细胞肺癌 Akt2慢病毒载体 细胞增殖 凋亡
年,卷(期) 2016,(1) 所属期刊栏目 基础医学研究
研究方向 页码范围 22-27
页数 6页 分类号 R373
字数 4073字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1672-3511.2016.01.006
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 李为民 四川大学华西医院呼吸科 186 1195 17.0 27.0
2 刘丹 四川大学华西医院呼吸科 116 499 13.0 17.0
3 陈渤江 四川大学华西医院呼吸科 3 20 3.0 3.0
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研究主题发展历程
节点文献
非小细胞肺癌
Akt2慢病毒载体
细胞增殖
凋亡
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
西部医学
月刊
1672-3511
51-1654/R
大16开
成都市武候区浆洗街8号国嘉南苑10F-6号
62-243
2003
chi
出版文献量(篇)
11853
总下载数(次)
7
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
论文1v1指导