沉默α-catulin基因的人舌鳞状细胞癌TSCCA细胞模型的建立

• 作者: 刘明媛 张斌 葛树卿 薛中原 郝丽静 韩春耀 马雪
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 癌,鳞状细胞 舌肿瘤 α-catulin基因 TSCCA细胞 细胞转染
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 481-485,后插2
• 页数: 6页
• 分类号: R739.86
• 字数: 3689字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20160312

摘要

目的:设计并构建α-catulin-shRNA表达载体,建立沉默α-catulin基因的人舌鳞状细胞癌(TSCC),TSCCA细胞模型并观察其沉默效率,为TSCC的基因治疗提供依据.方法:TSCCA细胞分为转染组(转染sh-catu1、sh-catu2、sh-catu3和sh-catu4质粒)、阴性对照组(转染sh-nc质粒)及空白对照组(未处理).根据GenBank上获取的α-catulin mRNA序列,设计并合成4条α-catulin-shRNA质粒表达载体.测序鉴定后,经脂质体介导,将3组质粒分别转染至体外培养的人TSCCA细胞中,荧光显微镜观察各组TSCCA细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达;采用RT-PCR和Western blotting法检测TSCCA细胞中α-catulin基因的mRNA及其蛋白相对表达水平及沉默效率.结果:测序鉴定表明成功构建了编码α-catulin的shRNA质粒表达载体sh-catu1、sh-catu2、sh-catu3和sh-catu4;转染TSCCA细胞后,荧光显微镜下观察到表达载体在细胞中成功表达.RT-PCR检测,与空白对照组比较,转染组细胞中α-catulin mRNA表达水平降低(P＜0.05),沉默效率升高(P＜0.05);与阴性对照组比较,转染组细胞中α-catulin mRNA相对表达水平降低(P＜0.05),沉默效率升高(P＜0.05).Western blotting法检测,与空白对照组比较,转染组细胞中α-catulin蛋白相对表达水平降低(P＜0.05),沉默效率升高(P＜0.05);与阴性对照组比较,转染组细胞中α-catulin蛋白相对表达水平降低(P＜0.05),沉默效率升高(P＜0.05).结论:成功构建α-catulin-shRNA重组质粒载体,建立了沉默α-catulin基因的人TSCC的TSCCA细胞模型,为研究α-catulin基因在TSCC发病机制中的作用提供了细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马雪	辽宁医学院附属第一医院口腔科	5	168	2.0	5.0
2	张斌	辽宁医学院附属第一医院口腔科	50	140	6.0	9.0
3	韩春耀	辽宁医学院附属第一医院口腔科	3	4	2.0	2.0
4	刘明媛	辽宁医学院附属第一医院口腔科	3	4	2.0	2.0
5	薛中原	辽宁医学院附属第一医院口腔科	3	4	2.0	2.0
6	郝丽静	辽宁医学院附属第一医院口腔科	6	20	2.0	4.0
7	葛树卿	辽宁医学院附属第一医院口腔科	5	19	2.0	4.0