家蚕微孢子虫海藻糖酶(Trehalase)基因的生物信息学分析及原核表达和多克隆抗体制备

• 作者: 唐旭东 彭祥然 徐莉 戴卫江 李孝良 沈中元 陈功
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 家蚕微孢子虫 海藻糖酶 序列特征 基因克隆 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1026-1034
• 页数: 9页
• 分类号: Q959.115+|Q785
• 语种: 中文
• DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2016.06.012

摘要

海藻糖是家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)成熟孢子的主要糖类物质之一,海藻糖酶作为海藻糖代谢的主要催化酶,在微孢子虫的发芽及侵染过程中发挥重要作用.通过生物信息学分析发现,家蚕微孢子虫的海藻糖酶具有4个序列相似度较高的编码基因拷贝(NbTre1、Nb Tre2、NbTre3和Nb Tre4),除了NbTre4编码蛋白质的N端有18个氨基酸组成的信号肽,其他拷贝的编码蛋白质均没有信号肽结构域,但都具有少数的N-糖基化位点,而没有O-糖基化位点,此外,丝氨酸磷酸化位点的比率也较高,二级结构较为简单,仅有螺旋区和低复杂度区.基于生物信息学分析结果,设计特异性引物克隆了NbTre1基因,该基因片段长933 bp,编码310个氨基酸,预测蛋白质分子质量36.7 kD,蛋白质的氨基酸序列有2个潜在的N-糖基化位点和14个磷酸化位点.通过构建重组表达载体并转化Escherichia coli Rosetta(DE3)感受态细胞,获得NbTre1蛋白的表达菌株,利用IPTG诱导获得大量以包涵体形式表达的融合NbTre1蛋白,其分子质量与预期值一致.融合NbTre1蛋白经亲和层析纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA法测定多克隆抗体的效价达1∶25 600.通过Western blot检测验证了该多克隆抗体的特异性,制备的多克隆抗体能够应用于家蚕微孢子虫海藻糖酶的检测等.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈中元		17	5	1.0	2.0
2	唐旭东		18	8	2.0	2.0
3	戴卫江		4	0	0.0	0.0
4	李孝良		6	0	0.0	0.0
5	彭祥然		6	0	0.0	0.0
6	徐莉		11	1	1.0	1.0
7	陈功		4	0	0.0	0.0