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摘要:
目的:构建稳定表达成熟miRNA-140腺病毒表达载体.方法:从人类基因组中扩增出带有酶切位点的miRNA-140目的基因,将目的基因连接到穿梭质粒pDC316-mCMV-EGFP,进一步将带有目的基因的穿梭质粒重组到骨架质粒AdEasy,并将重组质粒转染到AAV-293细胞中包装成腺病毒载体,经过二次扩增之后获得高滴度的腺病毒,并且检测其包装效率及感染滴度.最后,用目的腺病毒感染骨肉瘤细胞,通过荧光定量PCR方法检测miRNA-140表达情况.结果:酶切鉴定和测序结果均表明,miRNA-140成功克隆入pDC316-mCMV-EGFP载体中.与AdEasy重组后,包装纯化具有感染性的腺病毒miRNA-140,通过荧光定量PCR检测,软骨肉瘤细胞中miRNA-140升高4.2±0.2倍.结论:成功构建了成熟miRNA-140的腺病毒表达载体.
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文献信息
篇名 miRNA-140过表达腺病毒载体的构建及鉴定
来源期刊 东南大学学报(医学版) 学科 生物学
关键词 miRNA-140 AdEasy系统 荧光定量PCR 骨肉瘤细胞
年,卷(期) 2016,(1) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 6-10
页数 5页 分类号 Q782
字数 3089字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1671-6264.2016.01.002
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作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 贺鹏 南方医科大学附属深圳恒生医院口腔科 4 5 2.0 2.0
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研究主题发展历程
节点文献
miRNA-140
AdEasy系统
荧光定量PCR
骨肉瘤细胞
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
东南大学学报(医学版)
双月刊
1671-6264
32-1647/R
大16开
南京市丁家桥87号
28-265
1960
chi
出版文献量(篇)
4012
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7
总被引数(次)
22144
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