基于点击化学的琼脂糖微球上溶菌酶定点偶联方法研究

• 作者: 孔英俊 康跻耀 张贵锋 杨小雁 杨帆 王明林 苏志国
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 化学
• 关键词: 溶菌酶 琼脂糖微球 定点偶联 点击化学
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 104-108
• 页数: 5页
• 分类号: O629.73
• 字数: 4852字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2016.01.104

摘要

以溶菌酶为模型，研究了一种基于点击化学的琼脂糖微球上蛋白质定点偶联方法。首先将琼脂糖微球使用1，4-丁二醇二缩水甘油醚活化后与对氨基苯乙炔反应，将炔基引入琼脂糖微球。其次合成了叠氮基癸酸，通过EDC／NHS法将叠氮基癸酸偶联到溶菌酶表面，将不同修饰位点的溶菌酶进行色谱分离后，通过点击化学使溶菌酶分子上叠氮基与琼脂糖微球表面上的炔基进行反应。 XPS分析结果表明偶联对氨基苯乙炔后的琼脂糖微球表面出现N元素，证明炔基成功偶联在微球表面。采用合成的叠氮基癸酸对溶菌酶进行修饰，质谱分析结果表明叠氮基主要出现3个位点，Lys1、Lys33和Lys96。将偶联位点为Lys96的溶菌酶进行了分离，通过点击化学反应将溶菌酶偶联在琼脂糖微球表面，质谱分析结果表明偶联的溶菌酶其酶解产物中未检测出多肽Gln74-Lys96，证明溶菌酶通过Lys96偶联在琼脂糖微球表面。该研究为偶联位点均一、可控的蛋白质偶联方法提供了参考。