脂肪酶产生菌的筛选及基因的克隆表达

• 作者: 兰英 宋文刚 赵雪
• 来源期刊: 北华大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 脂肪酶 筛选 基因克隆 纯化
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 生物科学·基础医学·药学
• 页码范围: 186-190
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3921字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11713/j.issn.1009-4822.2016.02.009

摘要

目的 筛选出脂肪酶活性较高菌株,通过脂肪酶基因克隆技术获得高表达的脂肪酶,根据酶活曲线确定该酶的最适温度和最适pH.方法 采用透明圈法,以三丁酸甘油酯为底物筛选脂肪酶活性较高菌株;通过PCR扩增获得其脂肪酶基因Pseudomonas peli(PP)序列,构建pET-28 a表达载体,并在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行异源表达;通过Ni柱将脂肪酶纯化,并根据酶活曲线确定该酶的最适温度和最适pH.结果 筛选到一株脂肪酶活性较高的菌株,16S rRNA基因序列比对结果初步鉴定为Pseudomonas peli.PCR扩增得到的基因片段长度为801 bp,其序列与Pseudomonas peli中的脂肪酶基因序列相似性达到100%,PP基因在大肠杆菌中异源表达蛋白的分子量约29 KD,该蛋白在55℃、pH 7.0时活性最高.结论 通过基因克隆表达后得到的脂肪酶Ni柱纯化后纯度达95%以上,且耐高温,为脂肪酶工业化应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋文刚	北华大学基础医学院	17	97	5.0	9.0
2	赵雪	北华大学药学院	33	38	4.0	5.0
3	兰英	中国科学院微生物研究所	3	6	2.0	2.0