家蝇C-型凝集素的克隆与功能分析

• 作者: 刘艳娟 唐婷 柳峰松 路永鹏 邢建晓
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 家蝇 C-型凝集素 RNAi 细菌刺激 先天免疫 模式识别受体
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 16-24
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2016.01.003

摘要

[目的]从家蝇Musca domestica中克隆一种C-型凝集素(C-type lectin)基因,并分析其在家蝇免疫过程中的功能.[方法]根据家蝇转录组信息,克隆了一条C型凝集素基因,将其命名为Mdlectin-C1.构建Mdlectin-C1的原核表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli中表达并纯化rMdlectin-C1蛋白,制备多克隆抗体.利用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)及Western blot技术对家蝇不同发育阶段和细菌感染前后Mdlectin-C1的表达水平进行检测.运用RNAi技术敲低家蝇1龄幼虫Mdlectin-C1基因表达,然后进行细菌刺激并观察幼虫存活率变化.[结果]Mdlectin-C1 cDNA包含一个546 bp完整开放阅读框,编码181个氨基酸残基,所推导多肽N端包含由21个氨基酸残基组成的信号肽,成熟肽中含有一个保守的碳水化合物识别结构域(carbohydrate-recognition domain,CRD).qRT-PCR及Western blot结果显示,家蝇从1龄幼虫到蛹的发育过程中,Mdlectin-C1表达量逐步上升,蛹期达到最大值.在革兰氏阴性菌大肠杆菌E.coli 和革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus刺激后,家蝇2龄幼虫Mdlectin-C1均上调表达,并分别在36和3h时达到最高值.利用RNAi技术成功敲低Mdlectin-C1表达.对Mdlectin-C1基因敲低的1龄幼虫进行细菌刺激,敲低实验组幼虫存活率显著低于正常对照组.[结论]Mdlectin-C1可能参与家蝇抗菌免疫应答,并在此过程中具有重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐婷	河北大学生命科学学院	20	116	8.0	10.0
2	柳峰松	河北大学生命科学学院	46	280	9.0	14.0
3	路永鹏	河北大学生命科学学院	2	9	2.0	2.0
4	刘艳娟	河北大学生命科学学院	2	13	2.0	2.0
5	邢建晓	河北大学生命科学学院	1	3	1.0	1.0