携带BARF1基因的重组巨细胞病毒的构建

• 作者: 于魁 张长风 朱丽华 李淑英
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 同源重组 电转化 细菌人工染色体
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 595-599
• 页数: 5页
• 分类号: R373.1
• 字数: 4258字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2016.07.001

摘要

目的 依据细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC)能够克隆大段DNA病毒的特点,通过galk为基础的同源重组,将EB病毒编码BARF1基因插入巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV),构建重组病毒.方法 PCR扩增带有巨细胞病毒UL57基因左右同源臂的galk及BARF1基因片段,经过电转化,进行同源重组,经含有galk培养基及脱galk培养基筛选,获得带有BARF1的巨细胞病毒细菌人工染色体克隆,提取质粒,转染到ARPE-19细胞,观察带有BARF1基因的巨细胞病毒对ARPE-19细胞的影响.结果 感染带有BARF1基因的巨细胞病毒的ARPE-19细胞形态由原来的长梭形变为变圆、肿胀、胞浆颗粒增多,并且细胞生长失去接触抑制,出现重叠生长现象.结论 建立了携带BARF1基因的重组巨细胞病毒;同时表明利用细菌人工染色体,可方便地对病毒基因组进行准确操作.