棉铃虫精氨酸激酶(AK)的表达规律

• 作者: 刘小宁 程婷婷 赵洁 马纪 黄丽娜
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 精氨酸激酶(AK) 棉铃虫 表达纯化 酶活分析
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 397-405
• 分类号: Q785|Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.03.011

摘要

精氨酸激酶(arginine kinase,AK)是一种磷酸转移酶,参与无脊椎动物的细胞内能量代谢.为深入了解AK在棉铃虫(Helicoverpa armigera)细胞色素P450 (cytochrome P450) CYP6B6基因表达过程中起到的作用和调控机理,基于酵母单杂交结果采用RT-PCR从棉铃虫中肠cDNA扩增得到棉铃虫精氨酸激酶(HarmAK),构建大肠杆菌(Escherichia coli)重组菌株BL21:pET28a-HarmAK,异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达后通过镍柱纯化获得目的蛋白,Western blot检测目的蛋白的表达和纯化结果,pH-分光光度法检测HarmAK蛋白的催化活性,qRT-PCR检测棉铃虫不同发育阶段和6龄幼虫不同组织中HarmAK基因的表达规律.研究结果表明,克隆得到HarmAK基因大小为1 068 bp,编码355个氨基酸,预测蛋白质分子量和等电点分别是39.8 kD和5.76.氨基酸序列分析表明,HarmAK蛋白不含信号肽和跨膜结构域.HarmAK在大肠杆菌BL21中为可溶蛋白,Western blot和pH-分光光度法结果显示,融合蛋白His-HarmAK的大小与预期一致,且活性达到(5.5±0.85) μmol/(min· mg),表明HarmAK能磷酸化L-精氨酸.HarmAK在棉铃虫的所有发育阶段和6龄幼虫的所有组织中均有表达,1龄幼虫及6龄幼虫中肠的表达量最高.本研究将为利用HarmAK基因作为分子靶标来控制棉铃虫的研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马纪	新疆大学新疆生物资源和基因工程重点实验室	80	657	14.0	23.0
2	刘小宁	新疆大学新疆生物资源和基因工程重点实验室	45	144	6.0	10.0
3	赵洁	新疆大学新疆生物资源和基因工程重点实验室	12	15	2.0	3.0
4	黄丽娜	新疆大学新疆生物资源和基因工程重点实验室	4	4	1.0	2.0
5	程婷婷	新疆大学新疆生物资源和基因工程重点实验室	2	3	1.0	1.0