丝瓜过氧化氢酶基因CAT1的克隆及表达分析

• 作者: 刘建汀 张前荣 朱海生 温庆放 王彬 陈敏氡
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 丝瓜 褐变 CAT1 基因克隆 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 2039-2048
• 分类号: S642.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0406

摘要

采用RT-PCR和RACE技术从普通丝瓜果肉中分离到1条长达l 755 bp的cDNA序列,并对其进行序列分析.结果表明,该序列包含1个1 479 bp的开放读码框(ORF);预测编码492个氨基酸,理论分子量为56.98 kD,等电点为7.126;编码的蛋白与黄瓜(Cucumis sativus)、拟南芥(Arabidopsisthaliana)和萝卜(Raphanus sativus)同源蛋白的相似性均在92％以上,显示其高度的保守性,将基因命名为LcCA T1,GenBank登录号为:KP222260.Wolf Psort预测其亚细胞定位于过氧化物酶体(Peroxisomal)内;Motif Scan分析显示,蛋白氨基酸序列344～ 352位和54 ～ 70位分别为过氧化氢酶近端血红素—配体及血红素活性位点特征序列,推测其属于典型过氧化氢酶类(typical catalase,tCAT).荧光定量PCR分析显示,LcCAT1具有组织表达特异性,在普通丝瓜品种‘福丝3号’叶片中表达量最高,将近为花、果实、根和茎中表达量的5倍.LcCA T1在所选的6个丝瓜品种的果肉中呈差异表达,普通丝瓜中的表达量均高于有棱丝瓜;在普通丝瓜品种‘福丝3号’鲜切及采后储藏褐变过程中随时间增加而呈现上调表达趋势,且与其酶活性的变化趋势基本一致.LcCAT1可能在丝瓜果肉褐变产生过程中发挥着一定的调控作用.