靶向RWDD3基因shRNA慢病毒载体的构建及功能鉴定

• 作者: 叶敏华 吴雷 廖长春 汲乾坤 祝新根 肖兵 范阳华 郭华
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 脑胶质瘤 RWDD3 慢病毒 shRNA
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 14-20
• 页数: 7页
• 分类号: R739.41
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201601003

摘要

目的 构建RWD结构小泛素化增强子(RWDD3) shRNA慢病毒表达载体,为探讨RNA干扰技术抑制人脑胶质瘤细胞RWDD3基因的相关研究奠定基础.方法 设计RWDD3的3条siRNA的靶点序列,合成含干扰序列的双链DNA发卡结构shRNA,分别与双酶切后的载体连接,构建3种重组质粒pGC-LV-shRNA1、pGC-LV-shRNA2和pGC-LV-shRNA3,并转化于DH5α感受态细胞,提取阳性克隆质粒测序,转染293T细胞,生产慢病毒颗粒,并检测病毒滴度.将3种重组慢病毒及阴性对照病毒分别感染人脑胶质瘤细胞U251,实时定量PCR和Western blot分别检测RWDD3 mRNA和蛋白的沉默效果.结果 测序结果证实3种慢病毒载体均包装成功,滴度分别为5×1011 TU/L、4×1011 TU/L、5×1011TU/L.感染U251后,RWDD3 mRNA及蛋白的表达量均较阴性对照组和未感染组明显降低(P＜0.05);其中以LV-RWDD3-shRNA-1作用显著,mRNA表达下调79.2％,蛋白表达下调68.2％ (P＜0.05);而阴性感染对照组和未感染组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功构建3种RWDD3 shRNA慢病毒表达,可有效下调U251细胞RWDD3 mRNA和蛋白的表达,其为进一步研究以RWDD3为靶点的脑胶质瘤基因治疗提供稳定转染细胞的载体奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	祝新根	南昌大学第二附属医院神经外科	98	318	9.0	13.0
2	郭华	南昌大学第二附属医院神经外科	52	194	7.0	12.0
3	吴雷	南昌大学第二附属医院	29	88	5.0	8.0
4	汲乾坤	南昌大学第二附属医院神经外科	5	18	3.0	4.0
5	叶敏华	南昌大学第二附属医院神经外科	15	36	4.0	5.0
6	范阳华	南昌大学第二附属医院神经外科	13	44	4.0	6.0
7	肖兵	南昌大学第二附属医院神经外科	6	12	3.0	3.0
8	廖长春	南昌大学第二附属医院神经外科	3	3	1.0	1.0