人血小板膜糖蛋白ITGB3基因终止突变c.1476G＞A的体外表达研究

• 作者: 何吉 刘瑛 吕杭军 朱发明 洪小珍 许先国 陈舒 陶苏丹
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 关键词: ITGB3基因 血小板膜糖蛋白Ⅲa 终止突变 体外表达
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 17-21
• 页数: 5页
• 字数: 3781字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2016.01.005

摘要

目的 对ITGB3基因新的终止突变c.1476G＞A进行体外表达研究,以阐明其功能.方法 应用体外定点诱变技术构建突变型ITGB3 c.1476G＞A cDNA的真核表达载体,转化感受态细胞,提取质粒后测序验证.采用非脂质体介导重组质粒转染中国仓鼠卵巢癌细胞株(Chinese hamster ovarian cancer,CHO)细胞,经G418筛选获取稳定表达细胞株.采用实时荧光定量PCR、Western印迹和流式细胞术分别检测CHO稳定表达株ITGB3基因的mRNA表达和血小板膜糖蛋白Ⅲa(glycoproteinⅢa,GPⅢa)糖蛋白水平.结果 成功构建野生型和突变型ITGB3 cDNA的真核表达载体,转染筛选后分别获得了稳定表达的CHO细胞株.突变型细胞株中CD61抗原表达量仅为野生型的37％,而ITGB3 mRNA转录水平为野生型的6％.Western印迹结果显示,野生型细胞株稳定表达完整的GPⅢa蛋白,而突变型CHO细胞株无完整的GPⅢa蛋白表达.结论ITGB3 c.1476G＞A终止突变可导致ITGB3基因的转录水平降低,影响GPⅢa蛋白合成及CD61抗原的表达水平.