罗非鱼无乳链球菌 EsxA 基因克隆与原核表达

• 作者: 刘振兴 柯浩 梁志凌 郝乐 马江耀 马艳平
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: Ⅶ型分泌系统 无乳链球菌 EsxA 基因 克隆与表达
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 35-39
• 页数: 5页
• 分类号: S852.4|Q789
• 字数: 3854字
• 语种: 中文

摘要

Ⅶ型分泌系统（T7SS）是近年来发现的分泌系统，分泌两种胞外蛋白，EsxA 基因编码的 ESAT6蛋白和 EsxB 基因编码的 CFP-10蛋白。分泌蛋白具有良好的免疫原性，促进细菌从巨噬细胞吞噬体逃逸、影响巨噬细胞凋亡及裂解细胞等生物学功能，与致病性密切相关。以罗非鱼源无乳链球菌为模板，克隆到294 bp 的 EsxA 基因，将目的序列克隆到 pMD18-T 载体，经测序，目的序列与无乳链球菌 EsxA 基因同源率在99％以上。EsxA 基因克隆到 pET32a 载体中，重组载体在28℃、0．5 mmol／L IPTG 诱导条件下表达量最大，可溶性表达。将纯化的 ESAT6蛋白免疫 Balb／c 鼠，成功制备 ESAT6蛋白鼠多克隆抗体，经 Western blot，ESAT6蛋白具有良好的反应原性。研究结果为进一步进行无乳链球菌 ESAT6蛋白的免疫学功能研究奠定了基础。