甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19(MAp19)在HeLa细胞的表达

• 作者: 李婷 李萍 程永婷 贾天军 贾晓晖 赵霞
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19 真核表达 转染 筛选
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 49-53
• 分类号: R392.11|Q786|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 构建甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19(MAp19)真核表达载体并表达MAp19.方法 应用PCR技术扩增得到MAp19基因,利用基因克隆技术构建真核表达载体pcDNA3.1/Myc-HisA-MAp19,酶切及测序对其进行鉴定;将构建成功的重组载体通过脂质体转染HeLa细胞,并采用G418筛选已获得整合有pcDNA3.1/Myc-HisA-MAp19的阳性细胞克隆,用荧光显微镜观察MAp19融合蛋白在HeLa细胞的定位;Western blot法检测MAp19融合蛋白的水平.结果 构建了具有筛选特征和能够稳定表达的pcDNA3.1/Myc-HisA-MAp19重组质粒,测序结果与NCBI数据库比对完全一致;采用G418筛选后获得表达外源性MAp19蛋白的HeLa细胞,该蛋白定位于细胞质中;Western blot结果确定MAp19为分泌性蛋白.结论 MAp19真核表达载体构建成功,并能在真核细胞中表达出目的蛋白.