炎症相关miRNAs在LPS诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎性反应中的表达及miR-223真核表达载体的构建

• 作者: 杜丽丽 王月影 郝俊芳 钟凯 黄凯
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 炎症相关miRNAs 乳腺上皮细胞 LPS 真核表达载体 乳腺炎
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 183-189
• 页数: 7页
• 分类号: S857.26
• 字数: 4437字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.01.025

摘要

小分子RNA (miRNA)是近年来发现的一类内源性、非编码单链小RNA,其在乳腺组织免疫防御过程中发挥的调控作用逐渐引起了人们的关注.作者拟用qRT-PCR检测炎症相关miRNAs在LPS诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎症反应中的表达变化;构建3种miR-223真核表达载体并检验重组载体的转染效率.用不同浓度LPS处理小鼠乳腺上皮细胞(EpH4-Ev)48 h,qRT-PCR检测miR-223、miR-146a、miR-181a和miR-155的表达变化.以EpH4-Ev细胞基因组DNA为模板,PCR扩增pre-miR-223序列,以质粒Minicircle、pcDNA3.1(+)和转座子pig-gyBac为母本构建3种miR-223真核表达载体,将其转染EpH4-Ev细胞,通过观察荧光、qRT-PCR检测miR-223的表达,评价重组质粒转染效率.结果:qRT-PCR检测结果表明,LPS诱导EpH4-Ev细胞炎症反应时,4种炎症相关miRNAs的表达均显著(P＜0.05或P＜0.01)增加,并呈现不同程度的剂量依赖性;重组质粒转染EpH4-Ev细胞后,qRT PCR检测结果显示,Mini-miR-223质粒转染组的miR-223表达水平无统计学差异(P＞0.05);PB-miR-223和pcDNA-miR-223转染EpH4-Ev细胞后,miR-223的表达均极显著(P＜0.001)增加.本研究表明炎症相关miRNAs参与LPS诱导小鼠EpH4-Ev细胞的炎性反应过程.成功构建3种miR-223真核表达载体,为后续miRNAs在乳腺炎症反应中的功能研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王月影	河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室	111	590	13.0	19.0
5	钟凯	河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室	36	105	6.0	9.0
6	黄凯	河南农业大学牧医工程学院	8	17	2.0	4.0
7	杜丽丽	河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室	3	2	1.0	1.0
11	郝俊芳	河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室	1	2	1.0	1.0