大鼠成熟的肺表面活性蛋白 B 的原核表达及纯化

• 作者: 代维 刘大维 刘钦 周代君 周继红 张潇骏 王万能 袁丹凤 邱俊 顾仕苓
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 肺表面活性蛋白 B 原核表达 免疫印迹 蛋白纯化 大鼠
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 18-23
• 页数: 6页
• 分类号: S852.21|Q789
• 字数: 5084字
• 语种: 中文

摘要

为表达和纯化 SP-B 蛋白，先对 SP-B 基因进行稀有密码子优化，PCR 反应获得 SP-B 片段，构建重组质粒 pGEX4T-1／SP-B，转化到 E．coli BL21（DE3）中诱导表达；用 SDS-PAGE 与 Western blot 进行检测；用 GSTPrep FF 16／10对融合蛋白进行纯化。经双酶切鉴定证实质粒中插入基因长250 bp，测序结果与大鼠 SP-B cDNA 序列相符；质粒转化后用 IPTG 进行诱导，在分子质量约34 ku 处出现1个新条带，与pGEX4T-1／SP-B 蛋白预期大小一致，且该融合蛋白能可溶性表达并被纯化。结果表明成功构建了pGEX4T-1／SP-B 重组质粒，表达、纯化得到 GST／SP-B 蛋白，为研究肺表面活性物质替代药物奠定了基础。