猪skMLCK基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率测定

• 作者: 曾阳阳 朱弘焱 田玉民 苏玉虹
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: skMLCK基因 RNA干扰 慢病毒载体 转染
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 兽医科技
• 页码范围: 70-73
• 页数: 4页
• 分类号: S852.6
• 字数: 2739字
• 语种: 中文

摘要

为了构建猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(skMLCK)基因有效短发夹RNA (shRNA)的慢病毒载体,筛选出最佳干扰效率的序列,采用RNAi技术,设计并合成3条siRNA干扰序列,插入到慢病毒穿梭质粒(hU6-CMV-puror-PloyA)上,与慢病毒包装系统共转染293T细胞,收集病毒上清并进行病毒滴度的测定,将其转染小鼠C2C12细胞,分别用实时定量PCR和Western blot方法检测细胞中skMLCK基因mRNA和蛋白的表达.结果显示:PCR扩增和测序分析结果显示靶向skMLCKRNAi慢病毒载体构建成功;转染小鼠C2C12细胞后,skMLCK基因mRNA和蛋白均受到不同程度抑制,实时定量PCR显示,抑制率分别为(29.2±4.43)％、(76.4±7.33)％、(20.0±1.8)％;Western blot显示,抑制率分别为(29.6±5)％、(42.4±1.6)％、(34.3±1.2)％.结论:成功构建猪skMLCK基因有效shRNA的慢病毒载体,确定干扰载体-2(skMLCK-RNAi-2)具有最佳干扰效果,证实skMLCK基因RNAi慢病毒载体能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为进一步研究该基因与肌肉肉质性状的关系奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田玉民	辽宁医学院畜牧兽医学院	50	94	5.0	6.0
2	苏玉虹	辽宁医学院畜牧兽医学院	112	408	10.0	14.0
3	朱弘焱	辽宁医学院畜牧兽医学院	25	46	3.0	5.0
4	曾阳阳	辽宁医学院畜牧兽医学院	2	4	1.0	2.0