重组虹鳟IFN-γ2的原核表达及抗IHNV活性分析

• 作者: 刘淼 卢彤岩 张奇亚 徐黎明 曹永生 赵景壮
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 虹鳟IFN-γ2 原核表达 抗IHNV活性 抗病毒状态 保护率
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 页码范围: 1586-1594
• 分类号: Q785|S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20150810013

摘要

为获得虹鳟IFN-γ2(rtIFN-γ2)抗传染性造血器官坏死病毒(IHNV)活性的相关数据,实验根据NCBI已发表序列设计引物,提取经植物血凝素刺激后的虹鳟头肾细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增471 bp的该基因完整开放阅读框.将该基因重组至原核表达载体pET32a中,并转化大肠杆菌Rosetta,进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示,目的蛋白以包涵体形式表达,大小约为38.4ku.重组蛋白经复性、纯化后在CHSE-214细胞上进行抗IHNV活性分析,结果显示,rtIFN-γ2在CHSE-214细胞上抗IHNV活性为6.63×106U/mg.Real-time PCR结果显示,rtIFN-γ2免疫后,虹鳟头肾、脾、肝中IRF-1、IRF-2、IFN-I、IFN-γ和Mx表达水平均显著提高,总体而言免疫后2天机体抗病毒状态弱于免疫后1天.攻毒保护实验结果显示,免疫后1天进行IHNV攻击时,鱼死亡率为40％,而免疫后2天进行IHNV攻击时,鱼死亡率达到80％.研究表明,原核表达系统制备的重组虹鳟IFN-γ2不仅具有体外抗IHNV活性,更能激发虹鳟的抗病毒状态,从而为虹鳟抵抗IHNV感染提供一定的保护力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张奇亚	中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室	60	602	14.0	21.0
2	徐黎明	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	26	65	5.0	6.0
3	赵景壮	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	17	33	4.0	5.0
4	刘淼	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	12	33	4.0	5.0
5	曹永生	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	14	29	3.0	4.0