携带Flag标签的人自噬相关蛋白4B的真核表达及功能鉴定

• 作者: 刘阳 宋烨琼 张立 徐小洁 晋帅 李玲 梁迎春 洪甜 董倩
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 自噬相关基因4B 真核表达 LC3 自噬
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 73-75
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 2203字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2016.01.017

摘要

目的:构建携带Flag标签的人自噬相关基因4B (ATG4B)的真核表达质粒,获得Flag-ATG4B融合蛋白,并检测其与LC3的相互作用.方法:以本实验室保存的乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增获得ATG4B序列,并将其插入pcDNA3.0-Flag载体构建成重组质粒,转染HEK293T细胞后用Western印迹检测融合蛋白的表达,用免疫共沉淀检测ATG4B与LC3的相互作用.结果:菌液PCR和重组质粒的双酶切结果及测序均表明重组质粒构建成功,Western印迹表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达,免疫共沉淀结果表明表达的ATG4B能与LC3结合.结论:构建了pcDNA3.0-Flag-ATG4B真核表达质粒,表达的ATG4B蛋白对LC3的切割至关重要,这为进一步研究ATG4B在自噬过程中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘阳		86	402	10.0	14.0
2	徐小洁	军事医学科学院生物工程研究所	51	112	6.0	7.0
3	董倩		3	2	1.0	1.0
4	梁迎春	军事医学科学院生物工程研究所	10	36	2.0	6.0
5	洪甜	军事医学科学院生物工程研究所	5	1	1.0	1.0
6	张立	总参警卫局卫生保健处	8	13	2.0	3.0
7	李玲	军事医学科学院生物工程研究所	11	10	2.0	2.0
8	宋烨琼		4	3	1.0	1.0
9	晋帅		6	17	3.0	4.0