高粱抗虫基因CYP71E1表达载体的Gateway技术构建

• 作者: 付莉 李金红 霍岩
• 来源期刊: 农药
• 学科: 工学
• 关键词: 高粱 表达载体 Gateway CYP71E1
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 科研与开发
• 页码范围: 661-664
• 页数: 4页
• 分类号: TQ450
• 语种: 中文

摘要

[目的]探讨高粱HCN途径关键酶CYP71E1基因对玉米幼苗抗螟虫的影响,为培育抗玉米螟新品种奠定基础.[方法]以高粱自交系BTx623幼苗总RNA为模板,反转录成cDNA,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增出1854 bp的CYP71E1基因全长.利用基于位点特异性重组的Gateway技术,通过TOPO克隆将该基因克隆到入门克隆(pCRTM 8/GW/TOPO(@)),在LR克隆酶作用下将入门克隆重组到表达载体(pMDC141)中.[结果]成功构建pMDC141-CYP71E1表达载体并将构建好的表达载体导入农杆菌EHA105,PCR和测序表明所构建的载体及获得的工程菌与预期的完全一致.[结论]Gateway克隆技术与传统的克隆方法相比具有阳性克隆率高、快速、灵活等优点.