滚环转录结合定点切割制备小RNA的技术探究

• 作者: 李灿 梁兴国 潘孝明 王星宇 王静 董平
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 滚环转录 定点切割 DNAzyme RNase H DNase Ⅰ 小RNA
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 245-251
• 页数: 7页
• 分类号: Q789
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.03.0044

摘要

[目的]优化滚环转录及定点酶切中关键技术,提高小RNA合成量.[方法]通过在引物与模板之间设计不互补部分,形成泡状凸起,引发滚环转录;使用天然DNAzyme 10-23定点剪切转录产物;另外改变RNase H酶切中Aid -DNA修饰核酸数目及位置,指导RNase H切割;DNase Ⅰ降解模板DNA后,不经高温失活,直接进入RNase H酶切体系.[结果]由凸起结构引发转录,转录效率提高约5倍;RNase H在仅有3个修饰核酸间隔分布的Aid-DNA-3b辅助下,可高效定点剪切,而DNAzyme 10-23无法充分切割滚环转录产物;未失活的DNase Ⅰ对Aid-DNA-3b的降解仅占8.7％,可直接进入RNase H酶切体系.[结论]引入凸起结构可提高转录效率约5倍;DNase Ⅰ可直接进入酶切体系,随后使用Aid-DNA-3b介导酶切,产量可提高1.4倍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董平		44	442	13.0	20.0
2	王静		73	350	10.0	17.0
3	梁兴国		30	82	5.0	8.0
4	潘孝明		4	9	1.0	3.0
5	李灿		9	24	3.0	4.0
6	王星宇		4	23	2.0	4.0