实时荧光PCR检测转基因大豆外源基因的拷贝数

• 作者: 刘瑞芳 寿惠霞 陆玲鸿 韩强
• 来源期刊: 核农学报
• 关键词: 实时荧光定量PCR 拷贝数 转基因大豆 Southern印迹
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 植物诱变育种·农业生物技术
• 页码范围: 646-653
• 语种: 中文
• DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2016.04.0646

摘要

快捷、准确地检测转基因植物中外源基因的拷贝数,是转基因生物育种的重要研究内容,具有较大的应用前景.本研究以7个抗虫BT(Bacillus thuringiensis)和抗草甘膦EPSPS-G10转基因大豆事件为材料,以SYBR Green Ⅰ为荧光染料,利用实时荧光定量PCR方法,根据PCR反应获得的Ct值与起始模板数的对数值存在线性反比关系这一原理,建立了相关性系数在0.99以上的模板定量标线.通过目的基因与内参基因——大豆肌动蛋白编码基因ACTIN的起始模板量比较,估算出各株系的目的基因拷贝数.数据显示,株系1、2、3和4的2个基因均为单拷贝,株系6的2个基因均有2个拷贝,株系5和7的2个基因的拷贝数为3.利用Southern印迹方法对材料1～4的拷贝数进行验证,结果表明,两者的检测结果基本一致,证明实时荧光PCR检测法是大豆外源基因拷贝数检测中快速有效的方法.实时荧光PCR高效快速检测基因拷贝数,对于大规模转基因株系的外源基因拷贝数检测应用具有重大意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩强	浙江大学生命科学学院植物生理与生物化学国家重点实验室	5	29	3.0	5.0
2	寿惠霞	浙江大学生命科学学院植物生理与生物化学国家重点实验室	14	136	7.0	11.0
3	陆玲鸿	浙江大学生命科学学院植物生理与生物化学国家重点实验室	2	9	1.0	2.0
4	刘瑞芳	浙江大学生命科学学院植物生理与生物化学国家重点实验室	2	9	1.0	2.0