构建稳定过表达转录辅助因子LBH的人间充质干细胞株

• 作者: 杨洋 段永娟 牛琳 王文天 胡晓 赵慧娟
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: limb-bud and heart 转录辅助因子 人间充质干细胞 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 40-43
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2973字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2016.01.009

摘要

目的:构建转录辅助因子LBH(limb-bud and heart)过表达的人间充质干细胞(MSC)株,研究Lbh基因对人MSC功能的调控.方法:通过分子克隆的方法构建人Lbh基因的慢病毒表达质粒pCDHP-Lbh,经限制性内切酶酶切和核酸测序鉴定,利用293T细胞包装表达Lbh基因的慢病毒及对照;将包装的病毒感染人MSC,利用表达载体携带的GFP报告基因,采用流式细胞术分选GFP阳性目的细胞;通过油红O染色鉴定阳性细胞的成脂分化能力,通过茜素红和硝酸银染色鉴定阳性细胞的成骨分化能力.结果:双酶切和测序结果表明正确克隆了人Lbh基因的全长CDS序列,定量PCR和Western印迹结果表明构建的pCDHP-Lbh重组质粒能够表达Lbh基因;流式分选获得LBH稳定表达的人MSC细胞株,该细胞株经成骨和成脂诱导分化培养后,油红O染色、茜素红染色和硝酸银染色结果均呈阳性.结论:构建了人Lbh基因的慢病毒表达质粒pCDHP-Lbh,并获得稳定表达Lbh基因的人MSC细胞株,该细胞株保留了向脂肪细胞和成骨细胞定向分化的能力.本研究为进一步探讨Lbh基因对人MSC功能的调控提供了重要的实验基础.