中试规模纯化重组鼠疫rF1-Ⅴ融合蛋白及其免疫原性分析

• 作者: 于蕊 于长明 任军 尹可欣 张晓鹏 张金龙 房婷 杨秀旭
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 鼠疫耶尔森菌 重组F1-Ⅴ融合蛋白 发酵 分离纯化 免疫原性 亚单位疫苗
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 医学与免疫生物技术
• 页码范围: 95-104
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.150080

摘要

重组F1-Ⅴ融合蛋白(rF1-Ⅴ)是目前在进行临床研究的鼠疫亚单位疫苗的主要成分.本研究摸索了rF1-Ⅴ的可溶表达条件,并对条件进行了优化和放大,确定的中试发酵工艺为:在重组菌对数生长期中期加入50 μmol/L IPTG,25℃诱导表达5h.通过硫酸铵分级沉淀、离子交换、疏水相互作用层析和凝胶过滤四步纯化,最终得到纯度为99％、回收率大于20％且各项检测指标合格的蛋白.在此基础上,将蛋白使用氢氧化铝佐剂进行吸附,在小鼠体内进行了免疫原性研究.ELISA测定两次皮下免疫后血清的抗体滴度.比较融合蛋白免疫组(rF1-Ⅴ)与单一抗原免疫组(rF1、rⅤ)以及联合抗原免疫组(rF1 +rⅤ)之间体液免疫反应的差异.结果显示:20 μg rF 1-Ⅴ免疫剂量组诱导的抗F1抗体滴度明显高于其他组,抗Ⅴ抗体滴度与其他组相比没有显著差异.表明本工艺制备的rF 1-Ⅴ抗原有望作为鼠疫亚单位疫苗的主要组分.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于蕊	军事医学科学院生物工程研究所	7	12	2.0	3.0
2	于长明	军事医学科学院生物工程研究所	29	191	7.0	13.0
3	张晓鹏	军事医学科学院生物工程研究所	10	26	3.0	5.0
4	房婷	军事医学科学院生物工程研究所	5	2	1.0	1.0
5	张金龙	军事医学科学院生物工程研究所	5	9	2.0	2.0
6	任军	军事医学科学院生物工程研究所	6	10	2.0	3.0
7	杨秀旭	军事医学科学院生物工程研究所	9	16	3.0	3.0
8	尹可欣	军事医学科学院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0