振荡法分离小鼠视网膜色素上皮细胞提取总RNA的效果

• 作者: 杨欣悦 王丽丽 王晨光 田蕊 程岩 苏冠方 赵亮亮 齐首楠
• 来源期刊: 中华眼视光学与视觉科学杂志
• 关键词: 视网膜色素上皮 细胞分离 小鼠 RNA提取
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 分子眼科学
• 页码范围: 19-24
• 页数: 6页
• 字数: 4697字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-845X.2016.01.005

摘要

目的 探讨应用振荡法分离小鼠视网膜色素上皮(RPE)细胞并进行总RNA提取的效果.方法 实验研究.应用机械法对4只小鼠眼制作眼杯,去除视网膜后应用RNA保护试剂及振荡的方法对小鼠RPE进行分离,将应用振荡法分离后的眼杯铺片,采用免疫细胞化学方法检测分离后RPE细胞残留情况;收集分离的细胞,提取总RNA.同时分别应用自发分离法、酶法、眼杯法各对4只小鼠眼RPE进行分离,提取总RNA,比较不同方法提取的RPE细胞总RNA量,并应用实时定量PCR方法对RPE细胞中RPE65、vWF及COL6A1 mRNA表达水平进行比较.数据采用单因素方差分析、独立样本t检验进行比较.结果 采用4种方法进行RPE分离得到的总RNA量差异有统计学意义(F=8.538,P＜0.01),免疫细胞化学方法证实应用振荡法可以使RPE细胞与脉络膜完全分离,得到的总RNA量为(234.47±49.13)ng,与自发分离法及酶法比较差异无统计学意义(P＞0.05),但低于眼杯法(P＜0.05).4种方法得到的RPE65的mRNA表达量差异有统计学意义(F=38.453,P＜0.01),通过实时定量PCR法检测振荡法RPE65的mRNA表达量与自发分离法相当(P＞0.05),低于酶法(P＜0.01),但要高于眼杯法(P＜0.01).体现脉络膜细胞污染程度的标志物vWF及COL6A1 mRNA相对表达量,4种方法差异有统计学意义(F=45.432、90.498,P＜0.01).振荡法vWF mRNA表达水平低于自发分离法(P＜0.05),与酶法相似(P＞0.05),远低于眼杯法(P＜0.01);COL6A1 mRNA表达水平与自发分离法及酶法相似(P＞0.05),远低于眼杯法(P＜0.01).结论 应用振荡法可有效分离小鼠RPE细胞,并最大限度地降低来自脉络膜的污染,经总RNA提取后可得到较多的总RNA量及较好的质量,此方法方便快捷、稳定性较好,适合小样本量的RPE细胞的基因转录水平分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王丽丽	吉林大学第二医院眼科	54	100	6.0	8.0
2	苏冠方	吉林大学第二医院眼科	105	393	10.0	13.0
3	王晨光	吉林大学第二医院眼科	29	70	3.0	7.0
4	齐首楠	吉林大学第二医院眼科	10	26	3.0	4.0
5	赵亮亮	吉林大学第二医院眼科	15	109	5.0	10.0
6	程岩	吉林大学第二医院眼科	8	20	2.0	4.0
7	田蕊	吉林大学第二医院眼科	12	34	4.0	5.0
8	杨欣悦	吉林大学第二医院眼科	4	5	2.0	2.0