运用重叠延伸PCR技术构建SGK3激酶PX结构域突变体

• 作者: 吕文杰 周建光 李山虎 洪鎏 潘耀振 王健 王洪涛 王芃 黄芳
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: SGK3激酶 重叠延伸PCR PX结构域
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 32-35
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2566字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2016.01.007

摘要

目的:构建SGK3激酶PX结构域突变体载体,观察其在人肾胚细胞293T中的表达与定位.方法:利用重叠延伸PCR原则设计引物,合成具有点突变的SGK3突变体,将其连接到pEGFP载体上,测序验证;将所获突变载体瞬时转染人肾胚细胞293T,利用荧光倒置显微镜检验突变体在细胞中的表达及功能实现.结果:测序结果表明合成了具有点突变的SGK3序列;荧光倒置显微镜下SGK3突变体相较野生型SGK3在293T细胞内的不均匀分布表明转染成功,突变体载体在人肾胚细胞293T中获得表达且有所定位.结论:通过改变PX结构域序列上第90位氨基酸可以使SGK3激酶失去定位的功能,从而为研究SGK3在细胞中的功能提供基础.