小鼠DAZL基因启动子核心区域分析及甲基化对其启动活性的影响

• 作者: 左其生 张文慧 朱睿 李东 王曼 王颖洁 王飞 纪艳芹 路镇宇
• 来源期刊: 安徽农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: DAZL 启动子甲基化 5-aza-C 基因活性
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 动物科学与动物医学
• 页码范围: 420-426
• 分类号: S865.133
• 语种: 中文
• DOI: 10.13610/j.cnki.1672-352x.20160512.024

摘要

旨在确定小鼠DAZL启动子基本活性区,并分析启动子区域甲基化对其启动子活性的影响,探究小鼠DAZL的表达调控机制.采用PCR法扩增不同长度的小鼠DAZL启动子,插入到pEGFP-N1和pGL3-Basic载体,构建重组载体.将重组载体转染GC-1细胞系,并通过添加适量DNA甲基化转移酶抑制剂(5-azacytidine,5-aza-C)逆转各试验组启动子片段的甲基化水平,然后利用双荧光素酶报告基因检测系统检测DAZL活性变化.双荧光素酶活性检测结果表明,小鼠Dazl启动子基本活性区域为5’侧翼区-370 ～-36 bp,在-370 ～-166bp区域存在不可或缺的重要调控元件;经5-aza-C处理后,各缺失片段载体转染的GC-1细胞DAZL的启动子活性与对照组相比均有不同程度的提升,但差异不显著.本试验确定了小鼠DAZL启动子基本活性区域,证明降低小鼠睾丸DAZL启动子区域甲基化水平,有助于DAZL在生殖细胞中特异性表达,为进一步探究DAZL生物学功能和调控机制提供参考.