一种新的基于Red重组及I-Sec I体内切割的大肠杆菌基因组无痕删减方法

• 作者: 周长林 方宏清 朱美勤 虞剑
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 大肠杆菌DH1 Red同源重组 无痕删除
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 生物技术与方法
• 页码范围: 114-126
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.150084

摘要

目前常用的基因修饰方法是在Red同源重组介导下,电转线性PCR片段替换染色体上指定序列.因PCR过程错误掺入,该方法常常会在同源序列部位产生一些突变.为了避免此类突变,我们建立了一种新的无痕删除方法.首先将含有抗性标记(两侧带有I-Sec I识别位点)的线性DNA电转到Red重组感受态细胞内,用抗性基因替换基因组上指定序列;然后,将携带融合同源臂(两侧带有I-Sec I位点)的供体质粒导入上述细胞,诱导表达I-Sec I内切酶切割供体质粒释放同源片段,同时切除染色体上抗性基因产生双链断裂,通过分子间同源重组实现无痕删除.我们应用该方法连续删除了大肠杆菌DH1基因组上11个非必需区,使基因组减小10.59％. PCR测序证明所有删减区域同源臂未发生突变,基因组重测序证明指定区域被删除.删减菌的生长变化不大,但耐酸能力有所改变,并对番茄红素合成有不同影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周长林	中国药科大学生命科学与技术学院	80	451	12.0	18.0
2	虞剑	中国药科大学生命科学与技术学院	7	6	2.0	2.0
4	朱美勤	中国药科大学生命科学与技术学院	1	2	1.0	1.0
10	方宏清	中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所	1	2	1.0	1.0