糖基化对Caldicellulosiruptor sp.F32中内切型木聚糖酶热稳定性的影响

• 作者: 吕明 孟冬冬 朱静 李福利 王灵 韩文杰
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 内切型β-1 4木聚糖酶 毕赤酵母 大肠杆菌 糖基化 热稳定性
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 开发与应用
• 页码范围: 300-306
• 页数: 7页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.03.0052

摘要

[目的]探讨糖基化对来自Caldicellulosiruptor sp.F32的GH11家族木聚糖酶的影响,揭示其工业应用价值.[方法]在大肠杆菌和毕赤酵母中表达木聚糖酶XynA及其催化模块Tm1.通过酶学性质对比,论证糖基化对酶学特征的影响.[结果]毕赤酵母分泌的p-XynA和p-Tm1可被糖基化修饰,而大肠杆菌表达的e-XynA和e-Tm1无法被修饰.糖基化未明显影响XynA的催化效率和热稳定性,但可提高Tm1的催化效率约1.5倍,而且在80℃、85℃下,p-Tm1的半衰期相对于e-Tm1分别提高了约1.5、2倍.另外,Tm1的热稳定性和酶活均显著高于XynA.通过对Tm1同源建模分析,两个糖基化位点(天冬酰胺N23、N189)可能对热稳定性有促进作用.[结论]酵母对Tm1的糖基化修饰可热稳定性和催化效率提高1.5～2倍,相比于XynA更适合工业应用.