检测牛奶中布鲁氏菌套式PCR方法的建立

• 作者: 侯喜林 林红丽 栾云艳
• 来源期刊: 黑龙江八一农垦大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 布鲁氏菌 套式PCR 奶样 奶牛
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 42-46,118
• 页数: 6页
• 分类号: S852.61
• 字数: 3609字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2090.2016.05.008

摘要

为检测牛奶中的布鲁氏菌，通过对布鲁氏菌外膜蛋白31 kDa的一段基因进行套式PCR扩增，建立从临床奶样中检测布鲁氏菌的方法。改进了奶样中布鲁氏菌基因组DNA的提取方法，通过正交试验的方法优化了套式PCR试验的反应条件，优化后的一扩PCR反应条件为：退火温度56.4℃，Mg2+浓度1.5 mM，rTaq酶0.2μL，引物0.3μM，dNTP浓度0.2 mM；二扩PCR反应条件为：退火温度53.3℃，Mg2+浓度1.5 mM，rTaq酶0.25μL，引物0.4μM，dNTP浓度0.1 mM。其敏感性为8 CFU·mL-1，比细菌分离试验敏感1000倍；与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌、隐秘杆菌和克雷伯氏菌均无交叉反应；与试管凝集试验检测布鲁氏菌病的阳性符合率是100%，阴性符合率是86.36%。试验建立的套式PCR方法可用于检测奶样中布鲁氏菌。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯喜林	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	115	607	13.0	19.0
2	栾云艳	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	3	17	2.0	3.0
3	林红丽	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	7	37	3.0	6.0