大豆△1-吡咯啉-5-羧酸合成酶基因GmP5CS1和GmP5CS2的克隆与过表达载体构建

• 作者: 王海棠 薛晨晨 赵晋铭 邢邯 郭娜 高明潇
• 来源期刊: 大豆科学
• 学科: 农学
• 关键词: 大豆 GmP5CS基因 Gateway技术
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·分子生物学
• 页码范围: 25-30,38
• 分类号: S565.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.11861/j.issn.1000-9841.2016.01.0025

摘要

利用同源克隆方法从强耐旱栽培大豆(Glycine max)品种齐黄22中克隆得到2个编码大豆△1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)的基因,分别命名为GmP5CS1和GmP5CS2.氨基酸序列分析发现,GmP5CS1包含1个长度为2 163 bp的ORF,编码720个氨基酸,等电点pI为6.70,分子量大小为78.38 kDa;GmP5CS2包含1个长度为2 271 bp的ORF,编码756个氨基酸,等电点pI为6.10,分子量大小为82.18 kDa.与NCBI公布的部分物种蛋白质序列比对发现,GmP5CS1与紫花苜蓿(Medicago sativa)的亲缘关系最高,GmP5CS2与豇豆(Vigna unguiculata)的亲缘关系最高.组织表达分析表明,GmP5CS1与GmP5CS2基因在大豆的各个组织中均有表达,其中叶和根中的表达量相对较高,茎中表达量次之,花和籽粒中的表达量相对较低.利用Gateway技术得到植物过表达载体pEarleyGate103-GmP5CS,再转入根癌农杆菌EHA105中,为GmP5CS基因的转化及功能分析奠定了基础.