低氧培养对胰腺癌 CFPAC-1细胞 miR-301 a表达的影响

• 作者: 夏翔 张坤东 朱麟 裘正军 黄陈
• 来源期刊: 中华胰腺病杂志
• 关键词: 胰腺肿瘤 缺氧 上皮间质转化 微RNAs
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 164-169
• 页数: 6页
• 字数: 3614字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2016.03.005

摘要

目的：观察低氧培养胰腺癌CFPAC-1细胞后miR-301 a表达的变化，探讨miR-301 a的可能作用机制。方法在1％O2环境中培养胰腺癌细胞CFPAC-1，相差显微镜下观察细胞形态变化。蛋白质印迹法检测细胞低氧诱导因子HIF-1α、miR-301a及其靶基因FOXF2，上皮型标志物E-cadherin、ZO-1、β-catenin，上皮间质转化（EMT）标志物Vimentin、N-cadherin、Fibronectin的表达。构建miR-301a慢病毒表达载体，建立稳定转染miR-301a的细胞株，以转染与miR-301a不匹配（ miR-301a-NC）的细胞作为对照组，观察细胞形态变化，检测FOXF2、上皮型及EMT标志物表达，划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果 CFPAC-1细胞在低氧环境培养后细胞外形不规则、多呈棱形、伪足较多，细胞间连接松散，向间质细胞形态改变。以常氧培养细胞的表达量为1，低氧培养4 d后细胞miR-301a表达量为2．82±0．01，HIF-1α为2．17±0．36，Vimentin、N-cadherin、Fibronectin分别为5．48±0．16、1．16±0．03、1．30±0．03，均显著上调；FOXF2、E-cadherin、ZO-1、β-catenin 分别为0．45±0．05、0．61±0．05、0．45±0．02、0．37±0．02，均显著下调，差异均有统计学意义（P值均＜0．01）。以转染miR-301a-NC细胞的蛋白表达量为1，转染miR-301a细胞的miR-301a、Fibronectin、Vimentin、N-cadherin 表达量分别为7．09±0．42、15．6±0．10、1．24±0．05、1．37±0．01，表达均显著上调；FOXF2、ZO-1、E-cadherin、β-catenin表达量分别为0．33±0．03、0．71±0．02、0．67±0．06、0．47±0．03，表达均显著下调，差异均有统计学意义（P值均＜0．01）。转染miR-301a-NC组、稳转miR-301a组CFPAC-1细胞18 h的覆盖划痕区面积分别为（54．68±43．1）％、（94．82±2．18）％；24 h的穿膜细胞数分别为（25±6）、（95±11）／100倍视野，稳转miR-301a组显著高于转染miR-301a-NC组，差异均有统计学意义（ P ＜0．05或＜0．01）。结论低氧培养后CFPAC-1细胞出现EMT改变，miR-301a表达上调。其机制可能是miR-301a通过抑制FOXF2表达从而促使胰腺癌细胞EMT。