利用吗啉代寡核苷酸技术下调早期斑马鱼胚胎lmna 基因的初步研究

• 作者: 何志旭 刘丰 吴西军 王志华 舒莉萍 黄慧敏
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 斑马鱼 lmna 基因下调 吗啉代寡核苷酸技术
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 85-90
• 页数: 6页
• 分类号: R-33
• 字数: 2796字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2016.08.014

摘要

目的：利用吗啉代寡核苷酸技术建立下调斑马鱼 lmna 基因的技术方法。方法在斑马鱼 lmna 基因序列中选择靶点，设计针对斑马鱼 lmna 基因的吗啉代寡核苷酸序列（lmna－MO），构建能特异指示 lmna 基因表达的 lmna－EGFP－pCS2＋重组质粒，并通过显微注射方式将二者共注射入斑马鱼胚胎中，通过观察胚胎中绿色荧光表达量反应 lmna 基因表达量，并通过蛋白质印迹法检测胚胎中 lamin 蛋白表达量。结果蛋白质印迹法检测斑马鱼体内 lamin 蛋白的表达，分别有大小为69 KD 和62 KD 两种蛋白表达。设计并构建了 lmna－MO 和重组质粒 lmna－EGFP－pCS2＋，单独注射 lmna－EGFP－pCS2＋质粒后观察到从6 hpf 到96 hpf 胚胎均有绿色荧光蛋白表达；二者共注射后观察到，与对照组相比，实验组从6 hpf 至30 hpf 胚胎中绿色荧光蛋白表达量均不同程度下降或消失；蛋白质印迹实验结果显示实验组胚胎内 lamin 蛋白表达量明显下降。表明已成功下调了斑马鱼胚胎 lmna 基因表达。结论可通过 lmna－MO 和重组质粒 lmna－EGFP－pCS2＋共注射方法下调斑马鱼 lmna 基因表达，并通过绿色荧光蛋白表达量反映下调效果。该方法可为深入研究人核纤层病提供良好的动物模型。