锰诱导体外培养耳蜗毛细胞的损伤与凋亡研究

• 作者: 卢连军 唐晓旭 宋勇莉 张建彬 李丹 王卫龙 田克勇 米文娟 邱阳 陈俊
• 来源期刊: 中华耳科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 锰 毛细胞 神经纤维 耳蜗 凋亡
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 265-271
• 页数: 7页
• 分类号: R764
• 字数: 6557字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2922.2016.02.028

摘要

目的：探讨锰诱导体外培养耳蜗毛细胞损伤与凋亡的关系。方法将出生3天的新生Sprague Dawley大鼠的耳蜗器官体外培养，将贮存浓度为100mM氯化锰用SFM稀释到终浓度为1mM，3mM，5mM后进行体外染毒处理耳蜗基底膜。应用鬼笔环肽染色特异性显示耳蜗毛细胞的静纤毛，同时用β-Tubulin对神经纤维进行染色，用TUNEL试剂盒；Cleaved caspase-3抗体对耳蜗基底膜进行染色，在激光共聚焦显微镜下分别观察耳蜗基底膜的毛细胞，神经纤维。结果耳蜗基底膜培养24小时，1mM氯化锰对耳蜗毛细胞及神经纤维损伤甚微，差异无统计学意义（P＞0.05），内，外毛细胞排列整齐规律，听神经纤维分布均匀，成束排列。最高浓度5mM氯化锰处理24小时后对神经纤维造成明显的损害，与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。当浓度逐渐增加，损伤愈加显著并呈浓度依赖性。2mM氯化锰处理，对耳蜗基底膜底转损伤较中转、顶转明显。不同浓度氯化锰处理24小时TUNEL染色阳性细胞随着氯化锰浓度的增加而增多；Cleaved caspase-3染色阳性细胞亦随着氯化锰浓度的增加而增多。结论通过大鼠耳蜗器官体外培养方法，发现氯化锰会造成毛细胞缺失，神经纤维变细变少，而这种损伤的机制与细胞凋亡密切相关。