小麦 Ta-SKP2A 克隆及其酵母双杂交诱饵载体的构建

• 作者: 于秀梅 刘大群 李铃仙 许媛 魏新燕 魏春茹
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 小麦 F-box 基因 SKP2A 诱饵载体构建 毒性检测 自激活效应
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 页码范围: 17-22
• 页数: 6页
• 分类号: Q784
• 字数: 4932字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2016.02.004

摘要

SKP2A 是调控细胞周期转录因子降解的 F-box 蛋白。为研究该蛋白在小麦-叶锈菌互作过程的作用，首先克隆获得中国春小麦 Ta-SKP2A 全长序列，然后将其与 pGBKT7载体连接，转入酵母 Y187感受态细胞中，构建酵母诱饵表达载体，并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性和自激活效应。结果表明，Ta-SKP2A 编码区序列长度为1146 bp，其 ORF 区编码一条由382个氨基酸组成的多肽。在 ORF 区两侧连接酶切位点（EcoR Ⅰ和 BamH Ⅰ），并将其与载体 pGBKT7连接，成功构建了包含目的基因的诱饵载体 pGBKT7-Ta-SKP2A，且含重组诱饵质粒的酵母菌株在SD ／-Trp营养缺陷平板上生长良好，其过夜培养物 OD600＞0．8，表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性。含重组诱饵质粒的酵母菌株在二缺、三缺及四缺营养缺陷平板上不能生长，表明诱饵质粒的表达产物不能自激活报告基因。成功构建了一个包含 Ta-SKP2A 的重组诱饵质粒，为深入筛选与其互作的靶蛋白，研究其在小麦-叶锈菌互作体系中的作用机制奠定了基础。