人 CAP1蛋白真核表达及细胞定位与功能

• 作者: 刘旭 刘晓丹 周平坤 张莹 曾妍 朱茂祥 潘秀颉 王彬 王豫 顾永清
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 细胞骨架 肌动蛋白 CAP1 亚细胞定位 细胞迁移 重组质粒
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 195-198,203
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201602010

摘要

目的：构建 CAP1蛋白真核表达质粒并使之在细胞内得以表达,确定 CAP1蛋白在细胞中的定位及其对细胞迁移的影响。方法以 HeLa 细胞 cDNA 为模板,经 PCR 获取 CAP1编码区 cDNA,将该编码区 cDNA 序列插入 pC-MV-Myc 质粒中,构建带 Myc 标签的真核表达重组质粒。重组质粒转染至293细胞中,Western blot 方法检测其在真核细胞内的表达；重组质粒转染 HeLa 细胞,免疫荧光法检测其细胞内的定位,划痕实验观察其对细胞迁移的影响。结果成功构建了 CAP1真核表达重组质粒,并在真核细胞内成功表达,确定 CAP1定位于细胞质中,划痕实验证明CAP1过表达的细胞迁移能力明显下降。结论在真核细胞中成功表达了 CAP1重组质粒且 CAP1定位于细胞质,其过表达对细胞迁移有抑制作用,为研究 CAP1的生理功能奠定实验基础。