巨型艾美耳球虫IMP1基因的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 唐牧之 林倩 殷光文 江和基 黄志坚 黄驹辉
• 来源期刊: 《福建农林大学学报（自然科学版）》
• 关键词: 巨型艾美耳球虫 IMP1基因 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 290-295
• 页数: 6页
• 分类号: S855.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2016.03.009

摘要

免疫映射蛋白1( IMP1)是一种从巨型艾美耳球虫中发现的蛋白，具有良好的免疫原性和免疫保护性。本试验通过EmIMP1基因的克隆、原核表达以及多克隆抗体的制备，为后续深入研究该蛋白的生物学及免疫学功能奠定基础。首先，从未孢子化的巨型艾美耳球虫新疆株卵囊中提取总RNA，反转录合成cDNA，PCR扩增EmIMP1基因片段。其次，将EmIMP1基因扩增片段连接到原核表达载体pET-28a构建表达质粒pET-28a-EmIMP1，转化至大肠杆菌BL21( DE3)菌株并进行表达；将纯化后的蛋白与等量弗氏佐剂乳化后皮下注射至2只新西兰大白兔体内，每隔2周免疫一次，一共免疫4次后取得的兔血清即为多克隆抗体。最后，用所获得的多克隆抗体，对纯化后的EmIMP1进行免疫印迹试验鉴定，用酶联免疫吸附测定法检测多克隆抗体的效价。结果表明，克隆出的EmIMP1基因的全长为1140 bp，诱导出的蛋白大小为70 ku ，且该蛋白在上清液和包涵体中均有存在。免疫印迹试验检测结果显示，用上述方法制备的多克隆抗体具有良好的特异性，酶联免疫吸附测定法检测结果表明该多克隆抗体具有高效价。因此，可通过原核表达蛋白EmIMP1免疫兔子制备特异性好且效价高的多克隆抗体。