人 FOXA 1蛋白的原核表达、纯化及蛋白互作分析

• 作者: 向勤 谭拥军 陈团辉 陈竹林
• 来源期刊: 湖南大学学报（自然科学版）
• 关键词: 转录因子FOXA1 原核表达 相互作用蛋白
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 【化学化工】
• 页码范围: 104-108
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

构建FOXA1的原核表达载体，诱导表达并纯化后获得人FOXA1的C端和N端蛋白片段，为寻找 FOXA1的互作蛋白提供材料基础。提取人乳腺癌细胞 MCF7的总RNA ，逆转录成cDNA ，设计引物PCR克隆FOXA1的cDNA ，再以此为模板扩增FOXA1的C端、N端cDNA片段，分别并克隆进带有GST 标签的原核表达载体pGEX‐4T‐1，构建重组表达质粒。双酶切及测序鉴定正确后，转化至大肠杆菌BL21 Rosetta DE3，经IPTG诱导，Glutathione Sepharose 4B 亲和纯化，通过 SDS‐PAGE 电泳及 Western blot 确定FOXA1蛋白的表达。与MCF7细胞裂解液孵育，进行GST‐Pull down试验，检测纯化蛋白与FOXA1已知互作蛋白 TLE3的相互作用。成功构建 pGEX‐4T‐1‐FOXA1‐C 和 pGEX‐4T‐1‐FOXA1‐N的原核表达载体；在大肠杆菌中诱导目的蛋白表达；经Glutathione Sepha‐rose 4B纯化后，获得了人FOXA1的C端蛋白片段GST‐FOXA1‐C与N端蛋白片段GST‐FOXA1‐N ；证实GST‐FOXA1‐C能与FOXA1已知互作蛋白TLE3的相互作用。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭拥军	湖南大学生物学院	14	25	3.0	4.0
2	陈竹林	湖南大学生物学院	1	0	0.0	0.0
3	陈团辉	湖南大学生物学院	1	0	0.0	0.0
4	向勤	湖南大学生物学院	4	2	1.0	1.0