基于CRISPR/Cas9技术的烟草NtDXR基因敲除及功能分析

• 作者: 夏庆友 易小慧 王根洪 罗培 聂梦云 陈晓乐 高军平
• 来源期刊: 烟草科技
• 学科: 工学
• 关键词: CRISPR/Cas9 烟草 5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶 荧光定量PCR 基因敲除
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 烟草农学
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 分类号: TS413
• 字数: 5494字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16135/j.issn1002-0861.20160601

摘要

为研究烟草5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶（1-Deoxy-D-xylulose-5-phosphate reductoisomerase, DXR）基因的表达模式和功能，从普通烟草（Nicotiana tabacum）品种红花大金元中克隆了NtDXR基因，并通过荧光定量PCR技术分析了NtDXR在红花大金元不同发育时期、不同组织中的表达模式。同时利用CRISPR/Cas9技术构建了NtDXR敲除载体，获得了DXR基因突变的植株。结果表明：NtDXR基因在花中的表达量最高，在雌蕊和叶中次之；利用CRISPR/Cas9系统定点敲除NtDXR基因后，检测目的基因靶位点序列发现有碱基的插入、缺失与置换，并且部分T0代转基因阳性植株呈现白化表型，暗示NtDXR基因在烟草叶绿素等色素合成过程中起重要作用，推测NtDXR基因的突变能阻断烟草质体色素的合成。