离子色谱法测定ACYW135群脑膜炎球菌结合物中Y群及W135群多糖含量

• 作者: 于旭博 刘爱萍 吴兵 孔素娟 王晶 袁菲 谢贵林 谭小梅 赵阳
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 脑膜炎球菌多糖蛋白结合物 高效阴离子交换柱层析-脉冲安培检测法( HPAEC-PAD) 多糖含量
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-14
• 页数: 8页
• 分类号: R378
• 字数: 4126字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2016.05.002

摘要

目的：利用离子色谱法即高效阴离子交换柱层析—脉冲安培检测法( HPAEC-PAD),测定ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖含量的方法,并加以验证。方法将ACYW135脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群多糖用三氟乙酸( TFA)水解为特异性单糖(葡萄糖、半乳糖),并去除水解液中残留的TFA,用HPAEC-PAD分析检测,用PA10糖分析柱分离单糖,电化学检测器测定葡萄糖及半乳糖含量,用Chrome-leon色谱工作站记录并分析数据。对上述方法进行专属性、准确性、重复性验证,确定该方法的检出限和定量限。结果 Y群和W135群多糖在TFA2.5 mol/L(终浓度)、90℃、4 h可完全水解为葡萄糖、半乳糖。对照品葡萄糖及半乳糖在0.10~60.00μg/mL 范围内,质量浓度和色谱峰面积呈较好的线性关系, r 均大于0.99,回收率为87.94%~109.80%,相对标准偏差(RSD)为1.00%~2.00%,检出限为0.05μg/mL(信噪比3∶1),定量限为0.10μg /mL(信噪比10∶1)。结论离子色谱法可同时检测脑膜炎球菌多糖蛋白结合物中Y群和W135群糖含量,该方法操作简便、灵敏、快速,干扰小,重现性好,适用于对相关疫苗生产过程中的质量控制。