华东葡萄泛素连接酶基因VpUIRP2和VoUIRP3的抗白粉病特性分析

• 作者: 姚文孔 王杰 王磊 王跃进 王辰 童威霍 谢小青
• 来源期刊: 果树学报
• 学科: 农学
• 关键词: 中国野生华东葡萄 泛素连接酶 白粉病 遗传转化 表达分析
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 种质资源·遗传育种·分子生物学
• 页码范围: 1477-1491
• 页数: 15页
• 分类号: S663.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13925/j.cnki.gsxb.20160107

摘要

[目的]分析华东葡萄抗白粉病株系‘白河-35-1’的Ring型泛素连接酶基因VpUIRP2和VpUIRP3的转基因植株对葡萄白粉病的抗性,研究这2个基因的抗白粉病特性,为改良欧洲葡萄抗病性提供可用基因.[方法]利用同源克隆的方法获得中国野生华东葡萄‘白河-35-1’泛素连接酶基因VpUIRP2和VpUIRP3的编码区序列(CDS);通过实时荧光定量PCR方法检测其在白粉菌诱导和水杨酸处理后的葡萄叶片中的表达;使用聚乙二醇(PEG)介导法转化拟南芥原生质体进行亚细胞定位;通过农杆菌介导法获得转基因‘无核白’和‘红地球’植株;经过苯胺蓝染色,利用血球计数板计数分析白粉菌在转基因植株叶片上的生长情况,鉴定转基因株系的抗病性.[结果]中国野生华东葡萄‘白河-35-1’泛素连接酶基因VpUIRP2和VpUIRP3响应白粉菌和水杨酸处理,表达模式明显区别于感病对照‘赤霞珠’.中国野生华东葡萄‘白河-35-1'VpUIRP2蛋白定位在细胞质,VpUIRP3蛋白定位无特异性.通过农杆菌介导的遗传转化获得4个VpUIRP2的转基因‘红地球’株系和1个‘无核白’株系,转基因株系对白粉病表现出抗性.[结论]中国野生华东葡萄‘白河-35-1’泛素连接酶基因VpUIRP2能增强葡萄对白粉病的抗性,可以作为抗病基因用于改良欧洲葡萄的抗病性.