口服sST2质粒DNA在炎症性肠病小鼠中的免疫水平

• 作者: 吕昌龙 孙逊 尉冰 徐莹 朱俊丰 李岩 杨芳莉 桑力轩 高云峰
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 口服 可溶性 ST2 质粒pcDNA3. 1 炎症性肠病
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: R511.7
• 字数: 3968字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2016.05.001

摘要

目的：制备口服可溶性ST2(Soluble ST2,sST2)质粒,观察其对于小鼠炎症性结肠黏膜免疫应答水平。方法提取小鼠脾脏总RNA,扩增sST2基因,并克隆至pcDNA3.1/myc-HisA载体,构建pcDNA3.1-sST2-myc-HisA质粒,借此转染COS-7细胞,使之表达 sST2-myc-HisA融合蛋白。利用脂质体LipofectamineTM 2000包裹,制备口服sST2质粒,经灌胃给予用葡聚糖硫酸钠( Dextran sulfate sodium, DSS)诱生溃疡性结肠炎的C57BL/6实验小鼠,并用组织病理学方法观察结肠黏膜组织形态变化。用Real-timePCR检测sST2基因表达,用免疫印迹检测sST2质粒融合蛋白的表达；用ELISA检测小鼠肠固有层淋巴细胞培养上清中细胞因子( IL-4、IL-5和IL-13)的分泌水平。结果 Real-time PCR检测到sST2基因的正确表达,经双酶切及测序鉴定,证明质粒pcDNA3.1-sST2-myc-HisA构建成功,免疫印迹试验在转染的COS-7细胞检测到sST2-myc-HisA融合蛋白的表达,其相对分子质量与预期的相符；观察到结肠黏膜组织形态发生的变化；Real-time PCR结果显示,sST2质粒组在结肠黏膜组织内sST2的表达水平明显高于pcDNA3.1组和生理盐水组(P<0.01)；ELISA结果显示sST2质粒组结肠固有层淋巴细胞培养上清中IL-4、IL-5和IL-13的分泌水平高于pcDNA3.1组和生理盐水组(P<0.05)。结论实验成功制备口服sST2质粒；该质粒可抑制小鼠炎症性结肠黏膜组织内Th2型免疫应答。