热稳定酯酰辅酶A合成酶的异源表达及酶学特性

• 作者: 季俊杰 王衍杰 董爽爽 郑舰艇
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 热稳定性 酯酰辅酶A合成酶 底物特异性 酶学性质 定点突变
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1477-1485
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20150589

摘要

[目的]为寻找能合成丙酰辅酶A和丁酰辅酶A等聚酮合成前体的生物催化剂,用体外酶学实验对一个酯酰辅酶A合成酶进行了表征.[方法]利用丙二酰辅酶A合成酶作为输入序列,通过BLAST程序在Caldicellulosiruptor owensensis OL的基因组中找到1个酯酰辅酶A合成酶基因.在大肠杆菌中进行了异源表达,并通过亲和层析进行纯化.底物谱、最适反应条件、稳定性和动力学参数通过体外酶学实验进行表征,而定点突变则用于活性中心的氨基酸残基的分析.[结果]该酶具有较好的底物宽泛性,可识别丙酸、丁酸、2-甲基丙酸、戊酸、3-甲基丁酸、2-甲基丁酸以及环己甲酸等一系列单酸.反应最适温度为30℃,最适pH为7.0.70℃保温8h后仍有45％的活性残留,表明该酶相对比较稳定.通过活性中心3个位点的定点突变可以改变酶的底物特异性.[结论]C.owensensis OL来源的酯酰辅酶A合成酶是潜在的生物催化剂,可以用于聚酮前体的合成.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	季俊杰	中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室	3	4	1.0	2.0
2	郑舰艇	中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室	2	1	1.0	1.0
3	董爽爽	中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室	1	1	1.0	1.0
7	王衍杰	中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室	1	1	1.0	1.0