副猪嗜血杆菌 ompP2基因在猪肺泡巨噬细胞中的表达

• 作者: 丛晓燕 于江 吴家强 孙文博 时建立 李俊 杜以军 王金宝 陈智 陈蕾
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 副猪嗜血杆菌 ompP2 基因 真核表达载体 猪肺泡巨噬细胞 表达
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 11-14
• 页数: 4页
• 分类号: S852.612
• 字数: 3184字
• 语种: 中文

摘要

为了进一步研究副猪嗜血杆菌(HPS)ompP2基因的功能,根据已发表的副猪嗜血杆菌核苷酸序列,设计并合成1对引物,PCR 扩增 HPS LZ 株外膜蛋白 ompP2基因,获得大小为1158 bp 的核苷酸片段,该片段纯化后克隆至 pEASY-Blunt 载体,转化后鉴定,再与真核表达质粒 pCI-neo 经过酶切和连接反应,转化感受态大肠杆菌 Trans-T1,双酶切鉴定,筛选阳性重组质粒并测序。通过脂质体法将 pCI-neo-ompP2转染猪肺泡巨噬细胞,通过 RT-PCR 和 Western blot 方法检测重组质粒是否表达。结果显示,成功构建了含 ompP2基因的副猪嗜血杆菌真核表达载体 pCI-neo-ompP2,提取转染该质粒的猪肺泡巨噬细胞的mRNA,进行 RT-PCR 扩增,在1000 bp~2000 bp 之间可见1条明显的条带。Western blot 发现在42 ku处出现目的条带。试验结果为后期研究副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞的机理奠定了基础。