伏马菌素B1单克隆抗体的制备及免疫学检测方法初步应用

• 作者: 姚静静 张改平 李青梅 王方雨 胡骁飞 邓瑞广 韩俊岭
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 伏马菌素B1 单克隆抗体 杂交瘤 ELISA
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 1009-1017
• 页数: 9页
• 分类号: S859.8
• 字数: 6593字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.05.019

摘要

拟制备灵敏高、特异性强的抗伏马菌素B1(FB1)单克隆抗体,并初步应用于FB1的检测,以期为FB1的免疫学快速检测提供技术支持.采用碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原FB1-BSA和FB1-OVA.以免疫原FB1-BSA免疫BALB/c小鼠,每四周免疫一次.四免后,小鼠脾B细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,采用ELISA筛选,建立分泌抗FB1抗体的单克隆杂交瘤细胞株;采用动物体内诱生腹水方法制备出抗FB1单抗,并鉴定单抗的各种性能;初步建立FB1免疫学检测方法.结果得到1株稳定分泌抗FB1单抗的杂交瘤细胞株2E11-H3,该细胞株分泌的mAbs的效价高达1∶1.02×106,亲和力常数平均值为7.98×1010 L·mol-1,亚型为IgG3.FB1 mAbs的工作浓度为1∶6.0×104,与FB1发生特异性反应,间接竞争ELISA测得IC50=43.65 ng·mL-1;与FB1结构类似物FB2和FB3的交叉反应率分别为385％和72.4％,与其他霉菌毒素及载体蛋白BSA和OVA均无交叉反应.样品回收率在85.85％～114.07％,平均值为98.81％;变异系数为10.11％.本研究制备出了灵敏度高、特异性强、亲和力高的FB1单抗,并初步建立FB1免疫学检测方法.