蓝藻橙色类胡萝卜素蛋白的基因克隆及在大肠杆菌中的异源表达和功能分析

• 作者: 刘娴 刘畅 张梦如 杨玉梅 罗著 邹竹荣 龚明
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 蓝藻 橙色胡萝卜素蛋白 宏基因组 单线态氧 亚甲基蓝
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 138-145
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.07.021

摘要

旨在体内证明蓝藻橙色类胡萝卜素蛋白（OCP）具备不依赖类胡萝卜素的单线态氧（1O2）清除功能。通过 PCR 扩增蓝藻 OCP 基因，对其进行原核诱导表达，并通过细菌点板和生长曲线测定法检验它在大肠杆菌中的抗1O2活性。结果表明，直接从蓝藻水体提取的宏基因组中成功扩增得到 OCP 基因 SyOCP，其编码区大小为954 bp。生物信息学分析表明，SyOCP 来源于主要蓝藻种类——集胞藻（Synechocystis sp. PCC 6803）。经 IPTG 诱导，SyOCP 基因在大肠杆菌中获得了高水平的可溶性表达。另外，异源表达 SyOCP 的重组大肠杆菌对常见的1O2光敏诱发剂染料——亚甲基蓝的耐受性得到了显著增强。蓝藻 OCP（不结合类胡萝卜素）内在的抗1O2功能在大肠杆菌中得到了体内验证。