坦布苏病毒NS1蛋白的表达及ELISA检测方法的建立

• 作者: 刁有祥 张媛媛 张敏敏 提金凤 李志杰 李秀丽
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭坦布苏病毒 NS1蛋白 间接ELISA 检测方法
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 970-977
• 页数: 8页
• 分类号: S858.325.3
• 字数: 6613字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.05.014

摘要

为了建立坦布苏病毒(TMUV)感染鸭群的抗体检测方法,以TMUV NS1的原核表达蛋白质作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,并对该方法进行了检测条件的优化.将TMUV NS1全基因序列克隆至pET-28a(+),利用BL21(DE3)表达NS1蛋白,纯化后其质量浓度为4.16 μg·μL-1.通过方阵试验,确定了NS1蛋白的最佳包被质量浓度是100 ng·孔-1,检测血清的最佳稀释倍数为40倍.随后对检测条件进行了优化,优化后的结果:抗原的最佳包被条件是4℃作用过夜;酶标二抗的最佳工作条件是稀释5 000倍,37℃作用1h;阴阳血清的临界值为0.278.一系列试验验证了该检测方法具有很强的特异性、敏感性、重复性.对采集自山东各地的80份血清样品进行检测,其检测结果显示,该方法与经典的鸡胚中和试验检测结果的符合率为93.5％以上,且比传统的中和试验更敏感.对TMUV感染鸭群的血清进行检测,描述了TMUV感染后鸭群抗体水平的消长规律,为该病的防治提供重要的理论依据.以NS1蛋白为包被抗原的间接ELISA方法的建立为临床上TMUV的感染提供了一种新的抗体检测方法,尤其是在TMUV早期感染的检测方面有着更为广泛的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刁有祥	山东农业大学动物科技学院	182	1328	18.0	28.0
2	李志杰		36	76	5.0	6.0
3	提金凤	山东农业大学动物科技学院	26	70	5.0	6.0
7	张敏敏	山东农业大学动物科技学院	7	24	3.0	4.0
8	李秀丽	山东农业大学动物科技学院	6	29	4.0	5.0
9	张媛媛	山东农业大学动物科技学院	7	35	4.0	5.0